罗非鱼（罗非鱼 鲷鱼）

做为当今世界第二大养殖业鱼种，全球100数个国家和地区都养殖业金枪鱼，中国的养殖业出口量着实曾一度达到当今世界养殖业总额的70%，成为最小的进口国。

由于雌性金枪鱼在很小的这时候就开始产卵虾子，且产卵期间幼体不长个头，因而养殖业户更愿意养殖业全雄金枪鱼。有意思的是，低温能介导利韦农幼体变雌鱼，而且那个现像已辨认出了40多年，但长久以来没人能解释清环境温度怎么导致利韦农幼体变成了伪雌鱼，直到11月22日自然指数学术期刊《现代生物化学》新浪网发表了烟台农学院季相山副教授项目组的该文，“环境温度介导鱼种性KO之谜”才被补齐。

11月24日下午，在季相山为枣庄养殖业户指导完净化水养殖业操作过程中的水质宏观调控痛点并返回烟台农学院后，齐鲁晚报·齐鲁壹点记者对他进行了专访，听他讲述重大科学研究突破实现背后的心路历程。

11月22日，自然指数学术期刊《现代生物化学》新浪网发表了烟台农学院季相山副教授项目组的该文。

用10年找寻锁匙再用4年完成断定在找寻环境温度宏观调控尼罗金枪鱼性别结构分化的“开关”后，季相山项目组的这一成果被广泛关注。当人们问及科研科技攻关所用时长的这时候，季相山总是微微一笑说，“经过了6年科技攻关。”但熟悉季相山的人都清楚，为补齐环境温度介导鱼种性KO的谜底，他已经花费了十几个十年间。

早在2009年做讲师时，季相山领到省里的自然科学基金后就开始做那个项目，彼时检测辨认出很多DNA抒发都发生了变化，但始终找不到是哪个DNA直接感受到了环境温度变化，这曾一度让他非常迷茫。在这种情况下，通过看大量相关资料，他大胆推测环境温度可能影响了某个表观遗传胺基酸。而找寻那个胺基酸并辨认出了怪异现像则是在10年后，“2019年上半年找寻了那个胺基酸，彼时就知道已经找寻了锁匙，剩下的就是怎么来断定它的问题了。”

烟台农学院师资博士后姚智磊是论文的第一作者，据他回忆，彼时找寻胺基酸的这时候很兴奋、很激动，因为这和新闻那样讲究时效性，他们是最早辨认出那个胺基酸的，“我那这时候还在读博，每年都是腊月二十八回家过春节，暑假一天都没有休息过。每晚做试验很辛劳，但很有干劲儿，忙到后半夜是常事儿。”

项目组里的博士生、硕士生很辛劳，做为导师的季相山着实忙到不可开交。

姚智磊透漏，每晚季同学都是第一个到办公室的。受季同学影响，他也要求自己每晚七点半到试验室，“做为副教授，季同学对待小学生不是命令他们，而是以身相教，所以他们小学生都很受鼓舞，很有干劲。”

对于金枪鱼，季相山一科学研究就是14个十年间。最初他觉得环境温度能让幼体变雌鱼很神奇，而且做为当今世界上最小的养殖业鱼，中国又是金枪鱼最小的进口国，因而季相山咬紧牙关始终在做相关科学研究。

比细丝细的生殖腺每天试验要取足足300个“要想科学研究那个现像，要得领到金属材料。”季相山说的“金属材料”，其实是虾子的生殖腺，“他们取的金属材料有环境温度处置的，也有环境温度不处置的，他们就是要看看环境温度处置与环境温度不处置的生殖腺之间的DNA抒发有何差异，因而取虾子生殖腺是整座试验操作过程中的关键一环。”

虾子的生殖腺有多难取？

季相山介绍，要想让利韦农幼体变成伪雌鱼，只能在虾子受精卵后的9天到21天把生殖腺抽出，这时未结构分化的生殖腺是最佳金属材料。但那个操作过程中，虾子只有三公分长，而生殖腺仅有细丝的1/10那么粗，在解剖学镜下才能勉强看到。

“前期为了完成采样，他们还专门买了蠕动泵，想把虾子的生殖腺给抽出，但操作后还是不行，他们又尝试用了十几种钳子。”季相山透漏，但凡钳子中间有一丁点缝隙，就无法夹起生殖腺，“后来还是选用Donzy的方法，用搜寻到的一把不锈钢钳子将生殖腺夹了出。”

为了做一次试验，项目组至少要以获取300个生殖腺。“造影镜下的生殖腺就和细丝那样，凸起的地方也就0.2毫米左右，在用钳子夹住生殖腺的这时候，刚开始手也发抖，经常有取不出的这时候，现在能有90%的成功率了。”姚智磊透漏，每天采样至少要持续两三天，采样完后，整座人感觉腰酸背痛，眼部由于始终经受解剖学镜的强光刺激也花的厉害，采样结束后连手机都不想看了，“这确实是很艰辛的操作过程。”

样本收集，始终贯穿了整座科学研究操作过程。而在解决完采样痛点后，季相山项目组又得面对造影口服痛点了。

“要想过抒发或者把DNA敲杀掉，就要要进行造影口服。敲杀掉那个DNA后，如果经低温处置没有效果了，或者通过过抒发断定其和低温处置的效果那样，才能说明它是在低温介导下起关键性作用的DNA。”季相山说，不可回避的是，金枪鱼的卵很硬，不足1毫米，因而首先要在造影镜下找寻受精卵卵的受精卵孔，再从受精卵孔将载体口服进去。

除去样本收集和造影口服，体外养鱼的难度也蛮大的。因为金枪鱼的卵孵化特性很怪异，幼体产卵后，幼体一般都把卵含在嘴中，直到虾子会游泳了才离开妈妈。如果要做造影口服操作，季相山项目组就要要把刚受精卵的卵从幼体嘴中抽出或用人工受精卵的方法以获取刚受精卵的卵，“幼体的口腔环境能分泌一些杀菌的物质，但拿出后就大大减小了成活率，他们后来是通过消毒剂解决的那个问题。”

在季相山看来，采样和造影口服是执行最难的，而从科学角度来说，如何辨认出DNA则是更为关键的。

“环境温度如何导致利韦农幼体变成了伪雌鱼，40多年来始终没能找寻答案。所以他们就想从机理上了解哪个DNA感受到了环境温度，从而开启了雄性通路，让利韦农幼体变成了表型雌鱼。”季相山指出，这篇该文就是回答了为什么低温能导致利韦农幼体变成伪雌鱼。

据季相山透漏，十几年来，一茬茬科学研究生接续参与，为成果的取得做出了很大贡献。其中，姚智磊本硕博都就读于烟台农学院，他在博士毕业的这时候发表过几篇好该文，完全可以到别的单位工作，但为揭示那个现像，最终还是选择留在烟台农学院继续做博士后。

“做为科研人员，失败是他们的常态，他们大部分时间都在经历失败。”季相山说，“项目组是30多岁为主的中青年项目组，大家在试验室里都很努力，我和这些年轻人在一起很快乐。”

据季相山透漏，现在虽然找寻了那个DNA，但由于环境温度介导鱼种性KO的现像比较怪异，因而其中还有一个未知胺基酸等待他们去找寻它。